Оценка двух доступных на рынке анализов на основе гибридизации in situ для выявления ВПЧ ДНК в зафиксированных в формалине и залитых парафином тканях

Введение

Как стало известно, папилломавирус человека (ВПЧ) играет решающую роль в патогенезе дисплазии в аногенитальной области. Однако техника выявления ВПЧ в зафиксированных в формалине и залитых парафином тканях все еще вызывает разногласия в оценках. Таким образом, цель данного исследования – оценить морфологические изменения непосредственно в образцах тканей при помощи системы выявления ДНК ВПЧ на основе гибридизации in situ.

 

Материалы и методы

При помощи смешанных проб на ДНК ВПЧ GenPoint (компания Dako, Глоструп, Дания) и набора для смешанной гибридизации in situ ZytoFast (компания Zytomed, Берлин, Германия) были проанализированы образцы тканей пациенток с цервикальной карциномой. Три линии клеток цервикальной карциномы со значительным числом копий ВПЧ на клетку (SiHa, HeLa и CaSki) использовались в качестве положительного контрольного образца при определении чувствительности, в то время как в качестве отрицательного контрольного образца использовались две ВПЧ-отрицательные клеточные линии (AC-1M32, MCF-7) и образцы мозговой ткани. Кроме того, для оценки достоверности гибридизации in situ экспрессия ДНК ВПЧ-16 в клеточных линиях была подтверждена специфичной для белка Е6 ВПЧ-16 ПЦР.

Результаты

Оба теста выявили явные признаки эписомальной и интергированной ДНК ВПЧ при 50 копиях ВПЧ на клетку. Тест компании Dako, способный обнаружить 13 штаммов ВПЧ высокого риска, дал положительный результат для всех образцов цервикальной карциномы. Тест Zytofast, служащий для выявления 16, 18, 31 и 35 штаммов, показал наличие ДНК ВПЧ в 9 из 10 образцов карциномы.

 

Заключение

Гибридизация in situ – это надежный и эффективный инструмент для выявления ДНК ВПЧ в зафиксированных в формалине и залитых парафином образцах тканей. Поэтому этот метод пригоден для анализа архивных препаратов на наличие папилломавирусной инфекции.

---