ПИФ – прямая иммунофлюоресценция
Метод прямой иммунофлюоресценции представляет собой способ непосредственного выявления антигенов хламидий. Люминесцентная микроскопия определяет хламидийные включения как образования в клетках эпителия с желто-зеленой, либо зеленой флюоресценцией на фоне коричнево-оранжевой цитоплазмы клеток. Включения имеют гомогенную, зернистую, либо смешанную структуру.
Прямая иммунофлюоресценция применяется в случаях: острой фазы заболевания; хронической фазы заболевания; установления этиологии инфекционных хронических процессов урогенитального тракта; беременности, отягощенной акушерским анамнезом; бесплодия неопределенного генеза.
Рис. 1. Прямая иммунофлюоресценция. Прямой метод предполагает использование помеченных флюоресцирующим красителем AT к интересующему Аг; AT взаимодействуют с Аг в местах их локализации, что и позволяет визуализировать метка.
Информативная способность прямой иммунофлюоресценции заключается в выявлении не только корпускулярных, но и растворимых антигенов хламидий. Данный метод работает вне зависимости от вероятных изменений тинкториальных особенностей микроорганизмов при заболевании и при лечении. Метод прямой иммунофлюоресценции является основным скрининговым методом диагностирования урогенитального хламидиоза. Его специфичность и чувствительность составляет 65-90% или 85-90% в случаях применения моноклональных антител. Оценивая результаты, следует иметь в виду, что в качестве положительных итогов теста оценивается исключительно показатель флюоресценции внутриклеточных включений, если использовались поликлональные антихламидийные антитела.
В случае использования моноклональных антител результаты считаются положительными, если в поле зрения присутствуют 10 ЭТ (элементарных телец), либо хотя бы одно внутриклеточное включение. Подготовка соскобных препаратов такая же, как и при цитоскопических исследованиях. Моноклональные антитела можно отличить одно от другого по неизменности обнаруживаемых форм ЭТ, яркости флюоресценции и уровню специфичности. При диагностировании описанным методом хламидий используют люминесцентный микроскоп.
Специалисты сходятся во мнении, что метод прямой иммунофлюоресценции отвечает требованиям высокой специфичности и чувствительности, однако при этом серьезно возрастают критерии компетенции лабораторных работников. Достаточно высокий уровень экспертной оценки методом прямой иммунофлюоресценции доступным бывает далеко не всегда, отчего усредненный показатель его чувствительности недостаточно высок. В случаях определения малого количества ЭТ метод не гарантирует необходимой чувствительности, что приводит иногда к ложноотрицательным результатам.
К непрямому методу иммунофлюоресценции прибегают в случаях, когда отсутствует ФИТЦ-конъюгат антихламидийных антител. В таких ситуациях подготовленный из клинических проб тем же способом, что и для прямой иммунофлюоресценции, препарат сначала обрабатывают антихламидийными антителами, которые получают методом иммунизации хламидиями кроликов, мышей, овец, либо других животных а потом – специфичной для данного, иммунизированного хламидиями, животного второй сывороткой. Антитела последней сыворотки являются конъюгированными с ФИТЦ. Специфичность и показания к использованию описанного метода сопоставимы с методом прямой иммунофлюоресценции.
Говоря о методах иммуноферментного анализа, следует отметить, что основаны они на выявлении растворимого антигена хламидии в предоставленных на исследование пробах. В клинической практике используются, преимущественно, наборы реагентов, образованные методом твердофазных ИФА-анализов для установления антигенов хламидий. Амплификации достигают, используя методы полимерной конъюгации, следствием чего является фиксация, когда для каждого связанного участка антигена определяется полимерная группа с высокомолекулярной составляющей.
Вследствие применения метода фермент-амплификации положительная проба приобретает желто-оранжевую окраску, интенсивность которой пропорциональна численности антигена хламидии. Точные результаты исследования определяются при помощи вычислительной техники.